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动物血清的使用指南,你知道吗?

发布日期:2018-05-03 作者:河南一祺生物技术 点击:

   血清在细胞培养中为细胞提供氨基酸,蛋白质,维生素(特别是脂溶性维生素如A,D,E,K),碳水化合物,脂肪,激素,生长因子,矿物质及微量元素。此外,血清还可以缓冲培养基,抑制蛋白水解酶,增加培养基的粘度,降低在移液或搅拌时造成的剪切力。

  

  对于动物血清的正确使用,这里做一个简单的说明。

  

动物血清_小鼠血清


  1、储存

  

  血清的保质期是5年,储存温度-10 ~ -30℃。

  

  血清长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,长期保存血清必须在-10℃以下储存,并避免反复冻融。

  

  2、解冻

  

  将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

  

  如果在37℃或更高的温度解冻血清,血清中会出现沉淀。此沉淀可能包括磷酸钙结晶,但不改变血清的性能,同样血清热灭活也会导致沉淀的形成。

  

  3、浑浊和沉淀

  

  所有的血清可能保留一些纤维蛋白原。某些外部因素可能引发纤维蛋白原转变为纤维蛋白,导致血清解冻后可能会观察到絮状物或混浊。这些物质的存在不会改变血清的性能。

  

  如果想去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装到无菌离心管中,以低速离心1~2min,上清液即可直接加入到培养基内使用。

  

  注意:不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物,因为这可能阻塞滤膜。

  

  4、热灭活处理

  

  通常不使用热灭活血清,除非某些特定的细胞系特别需要。热灭活会降低或破坏血清中的生长因子,影响某些细胞的生长。

  

  热灭活最初是为了灭活补体及支原体。目前,如果血清中出现支原体,可以通过过滤去除;而去除补体通常是不必要的,除非是在准备或检测病毒或细胞毒性试验时。有研究显示,血清37℃孵育就可以灭活血清中热不稳定的补体成分,只有很少一部分细胞在这种灭活血清中生长得更好,如胚胎干细胞和许多昆虫细胞。

  

  1)按正确操作解冻血清,恢复室温。

  

  2)水浴56℃提前预热。

  

  3)将准备好的血清和装有相同体积水的烧杯同时放入水浴锅,当烧杯中的温度计指示达到56℃时开始计时,灭活30min后结束,整个过程中需要随时摇晃混匀。


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