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悬浮细胞的传代培养

发布日期:2019-03-21 作者:河南一祺生物技术 点击:

  体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就需要传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,维持细胞种的延续。放平细胞瓶,当发现悬浮细胞长到瓶壁85%~90%时,从容器中取出细胞,以1:2或1:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为悬浮细胞的传代培养。

  

  实验材料:

  

  CO2培养箱、倒置显微镜、超净工作台、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯、悬浮细胞株、完全培养基(RPMLl640或DMEM)。

  

悬浮细胞的传代培养


  操作步骤:

  

  A.热培养用液:把已经配制好的培养液瓶子放人37℃水浴锅内预热。

  

  B.用75%酒精棉球擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

  

  C.正确摆放使用的器械:保证足够的操作空间,不仅便于操作而且可减少污染。

  

  D.点燃酒精灯:注意火焰不能太小。

  

  E.超净工作台内拆除已消毒空培养瓶的外包装。

  

  F.取出预热好的培养用液:取出已经预热好的培养用液,用酒精棉球擦拭好后放人超净工作台内。

  

  G.从培养箱内取出悬浮细胞:注意取出细胞时要旋紧瓶盖,用75%酒精棉球擦拭显微镜的台面,再在镜下观察细胞。


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